凍干保存人紅細(xì)胞的技術(shù)要點
更新時間：2022-06-02 點擊次數(shù)：1522
凍干穩(wěn)定劑的選擇
為了減少細(xì)胞損傷，在凍干液和再水化洗滌液中需要加入穩(wěn)定劑(凍干緩沖液、洗滌液中的大分子聚合物和碳水化合物)，紅細(xì)胞凍干穩(wěn)定劑文獻(xiàn)報道各異，主要包括：
1、大分子聚合物，如PVP、葡聚糖、骨膠等；
2、聚陰離子化合物，如焦磷酸、磷酸化肌醇；
3、碳水化合物，如葡萄糖、蔗糖、木糖、甘露糖等；
4、磷酸鹽緩沖液或鉀、鈉等金屬離子。
其中大分子聚合物和聚陰離子化合物的選擇及其分子量和在溶液中的濃度等因素，對細(xì)胞的回收率均有影響。進(jìn)一步的研究證明，PVP的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度受分子量和濃度的制約，即玻璃化轉(zhuǎn)變溫度隨分子的增大而提高，隨著水分的丟失(或在凍干體系中濃度的增加)而提高，凍干和保存生物樣品應(yīng)在保護(hù)劑的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度下進(jìn)行，以減少生物活性的丟失。
再水化過程中使細(xì)胞膜不受損傷 為了細(xì)胞的存活，凍干過程中細(xì)胞必須處于高滲狀態(tài)，所用保養(yǎng)液的滲透壓相當(dāng)于3～5倍生理滲透壓，在給人體輸注前需要經(jīng)過逐步洗滌。將細(xì)胞懸液的滲透壓調(diào)整到生理水平的過程中，容易出現(xiàn)細(xì)胞膜破裂，血紅蛋白流出的現(xiàn)象。
凍干過程中的溫度控制
紅細(xì)胞的凍干首先使細(xì)胞冰凍，由液態(tài)變成固態(tài)，然后使箱體內(nèi)的細(xì)胞在抽氣減壓、升溫的同時，水分升華，逐步達(dá)到干燥的目的。因此，冰凍、升溫與真空度三者關(guān)系如何協(xié)調(diào)、控制，對凍干效果至關(guān)重要。
